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影響瓊脂糖凝膠電泳制膠的幾個因素

對于一般的分析工作，特別是定量分析工作來講，人們強調(diào)制備的凝膠要有較好的可重復性。如果制備得到的凝膠本身沒有重復性，比如孔徑前后兩次凝膠相差頗大，那么在這樣的條件下，所得到的分析結(jié)果，其可信性就有問題，往往會使幾次結(jié)果不能重復。所以，為了要獲得可靠的分析結(jié)果，在制膠時對能影響凝膠聚合的種種因素必須加以控制。有哪些主要因素，又怎樣來控制它們的條件，分別簡述如下：(1)制備凝膠用的主要試劑(a)丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺至少是分析純級的試劑。存放時間一般不超過1年,如果存放時間過長...

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細胞培養(yǎng)前的滅菌處理技術(shù)

無論從事何種細胞培養(yǎng)，無菌技術(shù)都是絕對最重要的部分。細胞培養(yǎng)前的無菌處理技術(shù)分為三部分即：①工作環(huán)境及表面的處理；②細胞培養(yǎng)所用玻璃及塑料制品的處理；③實驗者的操作技術(shù)；還有哺乳動物細胞的處理及維持細胞生長所需要的培養(yǎng)液的無菌處理。1.工作環(huán)境的無菌處理在細胞培養(yǎng)早期，研究者可以依靠操作技術(shù)和盡可能地靠近火焰以達到細胞的無菌化，隨著工作環(huán)境的機械學發(fā)展，其無菌化程度已得到大大提高，免去了實驗者手指被燒灼的痛苦。層流超凈臺是使工作臺無菌化有效的手段，組織培養(yǎng)可在相對密閉而幾乎無...

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懸浮細胞的電融合轉(zhuǎn)染技術(shù)簡介

懸浮細胞的電融合轉(zhuǎn)染技術(shù)融合懸浮細胞的步驟與電穿孔的很類似，只是在進行高強度的電場脈沖前后，必須用低幅、高頻電場使細胞排成一條鏈。1用融合介質(zhì)（FM）洗懸浮細胞兩次，然后懸于FM中。洗滌細胞時，在臺式離心機上1000rpm下離心3分鐘，得到細胞沉淀，棄去上清液將細胞懸于新鮮FM介質(zhì)中。2將懸浮細胞轉(zhuǎn)移到相應的融合室內(nèi)。假如要使兩種不同的細胞彼此融合，轉(zhuǎn)移前要充分混合。3啟動介電電泳場，其振幅通常小于200V/cm，頻率在2MHz以內(nèi)，用顯微鏡檢測細胞是否排成一條鏈，調(diào)節(jié)振幅和...

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發(fā)酵罐中微生物生長特性及其在發(fā)酵工業(yè)中的應用

微生物是發(fā)酵工業(yè)的靈魂，對微生物控制的發(fā)酵過程進行優(yōu)化，我們要了解發(fā)酵罐中微生物的生長反應特性。微生物細胞生長是細胞個體內(nèi)許多化學反應的綜合結(jié)果。這些反應包括合成提供其它反應需要的吉布斯自由能；利用底物合成結(jié)構(gòu)單元，再聚合成大分子物質(zhì)，供合成細胞所需等。正常情況下，微生物細胞為了確保有序和高效生長，必須將這些反應有機地結(jié)合在一起，經(jīng)濟地分配胞內(nèi)各代謝途徑的通量。大腸桿菌是發(fā)酵研究中用得最多的微生物。在大腸桿菌生長過程中前人已觀察到下列現(xiàn)象∶(1)在大腸桿菌快速生長期間，生物合...

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懸浮細胞電穿孔轉(zhuǎn)染法的實驗流程詳解

[實驗原理]當細胞置于非常高的電場中，細胞膜就變得具有通透性，能讓外界的分子擴散進細胞內(nèi)，這一現(xiàn)象稱為電穿孔。運用這一技術(shù)，許多物質(zhì)，包括DNA、RNA、蛋白質(zhì)、藥物、抗體和熒光探針都能載入細胞。作為一種基因轉(zhuǎn)導方法，電穿孔已被廣泛用于各種細胞類型，包括細菌、酵母、植物和動物細胞；而且，它還能作為注射方法（稱為電注射），把各種外源物質(zhì)引入活細胞。與其他常用的導入外源物質(zhì)的方法相比，電穿孔具有很多優(yōu)點。一.不必象顯微鏡那樣使用玻璃針，不需要技術(shù)培訓和昂貴的設備，可以一次對成百萬...

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